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细胞在液氮罐保存方法及步骤

时间：2019-11-12 09:06:35 来源： 作者：admin
随着科技的进步成都金凤液氮罐也被众多领域所应用，不管是生活中还是生产中都能看到它的身影，如医疗行业，生物医学行业，金属生产行业以及精密仪器等。今天为大家介绍的是细胞在液氮罐保存方法及步骤

一、液氮罐的应用范围及用途

1.在生物医学行业中的应用：目前主要是用于牛、羊等优良种公畜以及珍惜动物的精液保存，以及远距离的运输和医学中的疫苗、菌毒种、细胞以及人、动物的器官等浸泡于成都金凤液氮罐储存的液氮中，长期活性保存。

2.在金属生产行业中的应用：利用成都金凤液氮罐中储存的液氮对金属材料进行深冷处理，可以改变金属材料的金相组织，显著提高金属材料的硬度、强度和耐磨性能。

精密仪器电子行业中的应用：将精密零件经过液氮深冷处理后进行装配，提高零件装配质量，从而提高设备或仪器的整机性能。

3.医疗卫生行业的应用：用液氮容器内储存的液氮作为制冷剂进行手术，治疗或冷藏冷冻细胞、组织等。冷疗仪用于医院临床各科室能够代替手术，安全无毒，无害痛苦少，不损害健康组织，杀菌效果良好。

4.美容领域的应用：主要用液氮的超低温来处理皮肤表层。如采用手术治疗，疤痕往往是不可避免的后遗性缺陷，而冷冻治疗却不会出现这些情况，而且效果也比较理想。

二、细胞在液氮罐保存步骤：

怎么在液氮罐里储存细胞呢?一般来讲，冻存细胞的步骤会影响到细胞复苏时的活力，所以在使用液氮罐储存细胞时应小心并按步骤操作：

1、预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷;

2、用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞(尽可能温和);

3、再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。

4、在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。

5、冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐最好;或者可以在4℃，2h;

三、细胞在液氮罐的储存分为两种：

液氮罐里一般灌有低温液氮，细胞的储存需要低温环境，放入-196度的液氮里对细胞是长期保存的一个适合的环境。常规液氮罐是将细胞存入液氮罐的液相里储存，有专用的方形抽屉式提篮，2ml冻存管放入冻存盒然后再放入提篮后浸入液氮里，完全浸入。使细胞完全处于液氮-196度环境下，才能够长期保存细胞。

还有一种是气相储存，气相储存的话，温度比液相储存要高一些，不过也能达到-190度，对于细胞储存来讲，也是足够了的。而且还能解决长期以来液相储存细胞经常出现而又难以避免的一些问题，比如样品污染，出罐爆管等等。相对来说，液相液氮罐相比气相来说，相同体积的液氮罐保存的时间也久一些.气相冻存的温度稍微高一些,但相同体积的液氮罐保存的时间短一些(液氮量少,所以加液氮的频率要高一些).气相需要频繁加液氮。